黃曲霉毒素作為強致癌物，在食品、飼料中的殘留檢測至關重要。免疫親和柱憑借其高特異性、高回收率的優勢，成為黃曲霉毒素凈化的核心工具。然而，不當操作可能導致柱效衰減、交叉污染甚至檢測數據失真。本文系統梳理黃曲霉免疫親和柱使用的全流程注意事項，為實驗室質量控制提供實用參考。
 

　　一、使用前"三查兩備"核心準備

　　1.包裝完整性檢查

　　確認鋁箔密封袋無破損，真空狀態良好（按壓無明顯形變）

　　檢查生產批號與有效期，過期柱子吸附效率可能下降30%以上

　　2.試劑預平衡

　　甲醇活化液需現用現配，避免長時間敞口放置導致氧化

　　水相緩沖液pH值嚴格控制在7.0-7.5，偏酸/偏堿均會破壞抗體活性

　　3.設備適配性驗證

　　確認流速控制器精度±0.1mL/min，流速波動＞15%將影響回收率

　　收集管需提前用10%甲醇潤洗，防止蛋白質吸附造成損失

　　二、操作過程"五禁三控"黃金法則

　　1.五禁原則

　　禁止反向沖洗：抗體固定方向性決定只能從上端進樣

　　禁止干柱運行：空氣進入將導致抗體結構不可逆破壞

　　禁止超載上樣：根據柱容量標注值，樣品毒素總量需≤80%標稱量

　　禁止有機溶劑沖擊：除甲醇/水體系外，乙腈等強溶劑會溶解抗體

　　禁止物理振動：劇烈搖晃可能使填料沉降不均

　　2.三控要點

　　流速控制：活化/清洗階段保持1.0mL/min，洗脫階段降至0.5mL/min

　　溫度控制：整個操作過程在4-30℃環境完成，高溫加速抗體失活

　　時間控制：從樣品上柱到洗脫完成需在2小時內完成，避免微生物滋生

　　三、使用后"雙模式"再生存儲

　　1.短期再生（≤7天）：用20mL純水以1.0mL/min流速沖洗，最后用5mL 20%乙醇封存，4℃冷藏

　　2.長期保存（＞7天）：需經3個循環的"甲醇-水-甲醇"再生處理，最終用分析純甲醇充滿柱體，-20℃冷凍

　　四、異常處理錦囊

　　1.流速變慢：可能是填料壓實或氣泡堵塞，可用5mL注射器反向輕柔抽吸

　　2.回收率下降：檢查是否因樣品基質過載，可增加10%柱容量或進行樣品稀釋

　　3.柱體漏液：立即停止使用，檢查柱頭密封圈是否老化變形

　　在GB 5009.24-2016等國家標準檢測中，嚴格遵循上述規范可使黃曲霉毒素B1回收率穩定在85%-110%，RSD≤5%。隨著單克隆抗體技術進步，新一代黃曲霉免疫親和柱已實現50次重復使用，但科學規范的維護仍是保障檢測可靠性的基石。